人B淋巴母细胞HMy2CIR培养指导

一、细胞培养条件

确保此次细胞培养符合标准要求，以实现最佳实验效果。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，建议在良好状态下使用完全培养液灌满细胞瓶并紧密封口，以确保细胞运输安全。请使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态。不过，在处理前需进行显微镜观察，对细胞生长情况拍摄并保存多张照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，如未提供照片，则视为收到细胞状态良好。

传代培养时，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的培养基以便进行对比。同时，在换液时，适当松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并在37℃、5% CO2环境中培养。若细胞密度超过80%，可进行细胞传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，在显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，快速操作，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，并以1000RPM离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基，最终放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐中，请在-80℃存放24小时后再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞可能在运输过程中易脱落，这是正常现象。若脱离细胞较多，可将所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，并收集上清以作过渡培养。之后沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打并消化1-2分钟，添加5ml完全培养基以终止反应。再离心、弃上清，并加入1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

如果在运输中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重 leakage 等问题，符合条件可重发。细胞如出现污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果以申请重发。常温发货细胞在静置24小时后—干冰冻存发货细胞复苏后24小时内如有大多数细胞未存活，也可重发（需真实清晰状态照片）。在此期间如有其他不良情况，请联系售后协商处理。[人生就是博]

2）不予重发的情况

如因客户造成污染、不当操作、非推荐培养体系等导致细胞状态不佳，或未提供细胞培养前3天的照片等情况，将不予重发。请在接收细胞后的2天内如实反馈相关问题，具体情况将依照我们的售后政策进行处理。